(CE) - เอ็มบริโอไก่ที่อยู่ในระยะต่างๆ ของการพัฒนาของเอ็มบริโอ ในไมโครไบโอล ในทางปฏิบัติจะใช้เพื่อแยก เพาะเลี้ยง และจำแนกไวรัส ริกเก็ตเซีย และแบคทีเรียในบางครั้ง สำหรับวัตถุประสงค์ในห้องปฏิบัติการ จะเลือก ECs สดที่ได้รับการปฏิสนธิซึ่งมีเปลือกโปร่งใสและไม่มีรอยแตกร้าว การฟักไข่จะดำเนินการในรังแบบขาตั้งโดยให้ปลายทู่ของไข่หงายขึ้นในตู้ฟักหรือเทอร์โมสตัทที่มีการระบายอากาศดีที่อุณหภูมิ 37 -37.5 ° C ความชื้นสัมพัทธ์ 63-65% สำหรับการติดเชื้อจะเลือกตัวอ่อนอายุ 4-13 วันที่มีหลอดเลือดเด่นชัด ถุงไข่แดง และเงาที่เคลื่อนที่ได้ ก่อนการติดเชื้อเปลือกไข่จะได้รับการบำบัดด้วยแอลกอฮอล์เผาและในบริเวณที่มีการแนะนำ (โดยปกติจะอยู่เหนือห้องอากาศ) ให้ทาด้วยทิงเจอร์ไอโอดีน 2% วัสดุหรือการวิจัย มันถูกฉีด เปิดหรือไม่เปิดเปลือก เข้าไปในถุงไข่แดง (rickettsia) เข้าไปในโพรงอัลลันโทอิกหรือน้ำคร่ำ (ไวรัสส่วนใหญ่) และนำไปใช้กับเยื่อหุ้มเซลล์ chorion-allantoic โดยทั่วไปมักฉีดเข้าไปในร่างกายของเอ็มบริโอหรือฉีดเข้าเส้นเลือดดำ EC ที่ติดเชื้อจะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทภายใต้สภาวะและระยะเวลาซึ่งขึ้นอยู่กับประเภทของจุลินทรีย์และวัตถุประสงค์ของการศึกษา ข้อมูลบางอย่างเกี่ยวกับผลลัพธ์ของการติดเชื้อสามารถรับได้จากการตรวจ EC ภายนอกด้วยกล้องจุลทรรศน์ (การฉีดหลอดเลือด การสูญเสียการเคลื่อนไหว ฯลฯ) อย่างไรก็ตาม ในกรณีส่วนใหญ่ EC จะเปิดขึ้น ในการทำเช่นนี้หลังการรักษาด้วยแอลกอฮอล์และทิงเจอร์ไอโอดีนเปลือกจะถูกตัดออกเหนือขอบของถุงลมโดยเริ่มจากอัลลันโทอิกก่อนแล้วจึงดูดน้ำคร่ำออกด้วยปิเปตหรือเข็มฉีดยาของปาสเตอร์เพื่อหลีกเลี่ยงความเสียหายต่อหลอดเลือดและ ถุงไข่แดง ตัวอ่อนและเยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic จะถูกเอาออกจากเปลือก ใส่ในจานปลอดเชื้อ และล้างด้วยเครื่องกลั่นที่ปราศจากเชื้อ น้ำและตรวจสอบ การศึกษาต่อไปของเอ็มบริโอและของเหลวนั้นขึ้นอยู่กับชนิดของจุลินทรีย์หรือไวรัสและวัตถุประสงค์ของการทดลอง

ดูค่า เอ็มบริโอไก่ในพจนานุกรมอื่นๆ

ไก่- ดูไก่
พจนานุกรมดาห์ล

การปรับไก่— 1. มีความสัมพันธ์กันในความหมาย กับคำนาม: ไก่ที่เกี่ยวข้องกับมัน 2. ลักษณะเฉพาะของไก่ 3. มีเจ้าของเป็นไก่ 4.ทำจากเนื้อไก่ 5.........
พจนานุกรมอธิบายโดย Efremova

ไก่- ไก่, ไก่. 1. การปรับเปลี่ยน ถึงไก่ ขนไก่. - ทำจากเนื้อไก่ ไก่ทอด- น้ำซุปเนื้อ 2. ในความหมาย คำนาม ไก่.ไก่.หน่วย ไก่ ไก่ cf. ฝูงนก......
พจนานุกรมอธิบายของ Ushakov

ไก่- โอ้โอ้
1. คุระและไก่ ขนไหน. เคโบน. โว้ย. Kth ทอด เค.น้ำซุป. //เหมือนไก่เลยไก่ อกที่ 2 (บีบจากด้านข้างยื่นออกมาข้างหน้าอย่างแรง........
พจนานุกรมอธิบายของ Kuznetsov

เทพไก่- ในหมู่บ้านรัสเซียจนถึงคริสตศักราช ศตวรรษที่ XX วัตถุพิธีกรรม มักเป็นหินที่มีรูทะลุ คล้ายหัวนก แขวนไว้ในเล้าไก่เป็นเครื่องราง......
พจนานุกรมประวัติศาสตร์

ไก่- ไก่โอ้โอ้ 1.ดูไก่. 2. ไก่ - กลุ่มนกซึ่งรวมถึงไก่บ้าน ไก่งวง ไก่ฟ้า ไก่ต๊อก และอื่นๆ บางชนิด
พจนานุกรมอธิบายของ Ozhegov

เอ็มบริโอ- EMBRYO, -a, m, (พิเศษ) เอ็มบริโอ (ใน 1 คุณค่า) ในระยะเริ่มแรกของการพัฒนา - คำคุณศัพท์ ตัวอ่อน, -aya, -oe และตัวอ่อน, -aya, -oe (ล้าสมัย) การพัฒนาของตัวอ่อน
พจนานุกรมอธิบายของ Ozhegov

เอ็มบริโอ- EMBRYO, embryo, m. (กรีกเอ็มบริโอ) (หนังสือ) 1. เอ็มบริโอ (พืช สัตว์ ; biol.) 2. การโอน เหมือนกัน (เกี่ยวกับความคิด ความคิด ฯลฯ) ตัวอ่อนของการออกแบบทางศิลปะ
พจนานุกรมอธิบายของ Ushakov

เอ็มบริโอ— ม. 1. ร่างกายมนุษย์หรือสัตว์ในระยะเริ่มแรกของการพัฒนา เอ็มบริโอ 2. การโอน การสลายตัว จุดเริ่มต้นของบางสิ่งบางอย่าง ความคิดความคิด ฯลฯ
พจนานุกรมอธิบายโดย Efremova

เอ็มบริโอ- EMBRYO (กรีก เอ็มบริโอ - เอ็มบริโอ) ซึ่งเป็นสิ่งมีชีวิตของสัตว์ในช่วงแรกของการพัฒนาเช่นเดียวกับทารกในครรภ์ ในส่วนที่เกี่ยวข้องกับพืช จะใช้เฉพาะคำว่า “เอ็มบริโอ” เท่านั้น..(

การแยกไวรัสในสัตว์ทดลอง

การเลือกสัตว์ทดลองขึ้นอยู่กับชนิดของไวรัส สัตว์ทดลองถือเป็นแบบจำลองทางชีววิทยา บางครั้งจำเป็นต้องดำเนินการ "ตาบอด" 3-5 ครั้งโดยไม่มีอาการก่อนที่จะสามารถปรับไวรัสให้เข้ากับสภาพห้องปฏิบัติการได้ อย่างไรก็ตาม สัตว์ทดลองไม่ไวต่อไวรัสบางชนิด ซึ่งในกรณีนี้จำเป็นต้องใช้สัตว์ที่ไวต่อไวรัสตามธรรมชาติ ตัวอย่างเช่นมีไข้สุกรและโรคโลหิตจางจากการติดเชื้อในม้า

วัตถุประสงค์ของการติดเชื้อในสัตว์ทดลอง:

1. ศึกษาการเกิดโรค

2. แยกไวรัสออกจากวัสดุที่ทำให้เกิดโรค

3. การผลิตเซรั่มภูมิคุ้มกันและภูมิต้านทานเกิน

4. การผลิตวัคซีน

5. การบำรุงรักษาไวรัสในสภาพห้องปฏิบัติการ

6. การไทเทรตเพื่อกำหนดปริมาณไวรัสต่อหน่วยปริมาตร

7. แบบจำลองทางชีวภาพสำหรับการแสดงปฏิกิริยาการวางตัวเป็นกลาง

การเลือกวิธีการแพร่เชื้อในสัตว์ทดลองขึ้นอยู่กับเขตร้อนของไวรัส ดังนั้นเมื่อปลูกฝังไวรัสนิวโรโทรปิก สัตว์จึงติดเชื้อเข้าสู่สมอง ระบบทางเดินหายใจ intranasally, intratracheally; Dermatropic - ใต้ผิวหนังและในผิวหนัง

การติดเชื้อจะดำเนินการตามกฎของภาวะปลอดเชื้อและน้ำยาฆ่าเชื้อ

มีหลายวิธีในการนำสารที่มีไวรัสเข้าสู่ร่างกายของสัตว์:

ใต้ผิวหนัง; - สมอง; - ในผิวหนัง;

เยื่อบุช่องท้อง; - กล้ามเนื้อ; - ลูกตา;

ทางหลอดเลือดดำ; - ในจมูก; - โภชนาการ;

หลังการติดเชื้อ สัตว์จะถูกทำเครื่องหมาย วางในกล่องแยก และเฝ้าติดตามเป็นเวลา 10 วัน การตายของสัตว์ในวันแรกหลังการติดเชื้อถือว่าไม่เฉพาะเจาะจงและจะไม่นำมาพิจารณาในภายหลัง

3 สัญญาณบ่งบอกถึงประสิทธิภาพของการติดเชื้อ:

การปรากฏตัวของอาการทางคลินิก

ความตายของสัตว์

การเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยา (ขนาด รูปร่าง สี และความสม่ำเสมอของอวัยวะ)

เอ็มบริโอไก่เป็นตัวอ่อนที่ได้รับการปฏิสนธิ ไข่ไก่ซึ่งตัวอ่อน (embryo) พัฒนาขึ้น การเพาะเลี้ยงไวรัสในตัวอ่อนไก่และนกกระทา เมื่อเร็วๆ นี้ได้กลายเป็นวิธีที่แพร่หลายในฐานะหนึ่งในวิธีที่ง่ายและน่าเชื่อถือที่สุดในการปลูกฝังและวินิจฉัยไวรัสและแบคทีเรียบางชนิด - Brucella, Rickettsia, Vibrio

ไวรัสของมนุษย์และสัตว์หลายชนิดสามารถเพาะเลี้ยงได้ในการพัฒนาเอ็มบริโอไก่ เนื้อเยื่อของตัวอ่อน โดยเฉพาะเยื่อหุ้มของเอ็มบริโอซึ่งอุดมไปด้วยเนื้อเยื่อเยื่อบุผิวที่เป็นเชื้อโรค เป็นสภาพแวดล้อมที่เอื้ออำนวยต่อการแพร่กระจายของไวรัสหลายชนิด ไวรัสที่มีคุณสมบัติ epitheliotropic (ไข้ทรพิษ, ILT ฯลฯ ) พัฒนาได้สำเร็จบนเยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงที่มองเห็นได้ด้วยตาเปล่า ตัวแทนต่างๆ ของ myxoviruses (ไข้หวัดใหญ่, โรคนิวคาสเซิล, โรคไข้หัดสุนัข ฯลฯ ), ไวรัสหลอดลมอักเสบติดเชื้อ, ไวรัสตับอักเสบลูกเป็ด, arboviruses ฯลฯ สืบพันธุ์ได้ดีในตัวอ่อนเมื่อนำวัสดุเข้าไปในโพรงอัลลันโทอิก ไวรัสบางชนิดสามารถเพาะเลี้ยงในถุงไข่แดงได้สำเร็จ

ข้อดี:

1. ทำกำไรได้อย่างประหยัดนอกจากนี้ยังหาไข่ได้ง่าย

2. การพัฒนาเอ็มบริโอไก่ขาดกลไกในการป้องกันเพราะว่า ระบบภูมิคุ้มกันยังไม่พัฒนา

3. เปลือกไข่ป้องกันแบคทีเรียและไวรัสไม่ให้แทรกซึมเข้าไปได้ สิ่งแวดล้อม;

ในการเพาะเลี้ยงและแยกไวรัสออกจากเอ็มบริโอของไก่ จำเป็นต้องใช้อุปกรณ์ง่ายๆ เช่น เทอร์โมสตัทหรือตู้ฟักแบบปกติ

เงื่อนไข:

1. ไข่ได้มาจากฟาร์มที่ปลอดภัย โรคติดเชื้อ;

2. เอ็มบริโอไก่จะดีกว่าถ้าได้มาจากไก่พันธุ์ขาว (Leghorn, Russian White) เพราะพวกมันทนทานต่อการยักยอกมากกว่าและไม่ตายจากอาการบาดเจ็บเล็กน้อย นอกจากนี้เปลือกของพวกมันยังมีสีขาวและโปร่งใสกว่าสายพันธุ์อื่น และมองเห็นได้ง่ายกว่า ซึ่งสะดวกในการดูและสังเกตขณะทำงานกับพวกมัน

3. สำหรับการฟักไข่จะเลือกไข่ที่ปฏิสนธิวางไม่เกิน 10 วันก่อน

4. พวกเขาใช้ไข่ที่ไม่ปนเปื้อน เนื่องจากไม่สามารถล้างก่อนฟักไข่ได้ และไข่สกปรกจะมองเห็นได้น้อยลงเมื่อดู (ovoscopy) และเมื่อทำงานกับพวกมัน เอ็มบริโออาจติดเชื้อได้ในระหว่างกระบวนการจัดการ

ไข่จะถูกฟักในตู้ฟักหรือในเทอร์โมสตัทที่มีเครื่องทำน้ำร้อนและอากาศเข้า และในระหว่างการฟักไข่ในเทอร์โมสตัทนั้น จะต้องกลับไข่วันละ 2-3 ครั้ง และเพื่อการแลกเปลี่ยนก๊าซที่ดีขึ้น ให้นำออกมาเป็นเวลา 5-10 นาทีขึ้นไปในอากาศ เพื่อรักษาความชื้นไว้ ให้วางภาชนะที่มีน้ำไว้ในเทอร์โมสตัทเพื่อการระเหย โดยอุณหภูมิในเทอร์โมสตัทควรอยู่ที่ 38°

การพัฒนาของตัวอ่อนเกิดขึ้นแล้วในวันแรกของการฟักตัว การวางสมองและโครงกระดูกเกิดขึ้น โครงสร้างของตัวอ่อนไก่เมื่ออายุ 7-9 วัน(ดูสมุดบันทึก)

สำหรับการติดเชื้อ มักใช้ตัวอ่อนอายุ 7-12 วัน การทำงานกับเอ็มบริโอไก่จะดำเนินการในกล่องห้องปลอดเชื้อโดยยึดตามภาวะปลอดเชื้ออย่างเข้มงวด

วัตถุประสงค์ของการติดเชื้อเอ็มบริโอไก่คือ:

1. แยกซับออกจากวัสดุสิทธิบัตร

2. การผลิตวัคซีน

3. การดูแลรักษาไวรัสในห้องปฏิบัติการ

4. การไตเตรทของไวรัส

5. แบบจำลองทางชีวภาพสำหรับการแสดงปฏิกิริยาการวางตัวเป็นกลาง

6. การศึกษาการแทรกแซงของไวรัสและการผลิตอินเตอร์เฟอรอน การติดเชื้อของตัวอ่อนไก่:

สำหรับการติดเชื้อ จะต้องเลือกตัวอ่อนที่มีชีวิตและมีความสามารถในการเคลื่อนไหวที่ชัดเจน ก่อนการติดเชื้อ ตัวอ่อนทั้งหมดจะได้รับการตรวจอย่างระมัดระวังในห้องมืดโดยใช้เครื่องตรวจไข่

ในระหว่างการปักเทียนตัวอ่อนก่อนการติดเชื้อ ปูกา (ช่องอากาศ) เส้นทางของหลอดเลือดขนาดใหญ่และตำแหน่งที่ปรากฏของตัวอ่อนจะถูกร่างไว้บนเปลือกด้วยดินสอง่ายๆ เช่น บริเวณบนเปลือกที่ตัวอ่อนอยู่ใกล้ที่สุด มัน. เครื่องหมายของปั๊ก ตำแหน่งที่ปรากฏของเอ็มบริโอ และเส้นทางของหลอดเลือดขนาดใหญ่ จะทำหน้าที่เป็นแนวทางในการเลือกตำแหน่งที่จะแนะนำวัสดุที่มีไวรัสในขณะที่ติดเชื้อ

เอ็มบริโอไก่ที่เลือกสำหรับการติดเชื้อจะถูกถ่ายโอนไปยังกล่องเพื่อดำเนินการกับตัวอ่อนเหล่านั้น ก่อนการติดเชื้อ เปลือกตรงบริเวณที่นำวัสดุจะได้รับการบำบัดด้วยแอลกอฮอล์เสริมไอโอดีนสองครั้งแล้วเผา ปริมาณการติดเชื้อคือ 0.1-0.2 ซม.

ขึ้นอยู่กับชนิดของไวรัสและวัตถุประสงค์ของการติดเชื้อจะแตกต่างกันไป วิธีการแนะนำวัสดุที่มีไวรัส:

1) การติดเชื้อของเยื่อหุ้ม chorioallantoic , ตัวอ่อนอายุ 7-12 วันใช้สำหรับการแยกและการเพาะเลี้ยงไวรัส neurotropic, dermatropic และ pantropic บางชนิด (ไข้ทรพิษ, ไข้สมองอักเสบ, ILT, โรคปากและเท้าเปื่อย, โรคพิษสุนัขบ้า, โรคระบาด ฯลฯ ) มี 3 ตัวเลือกการติดเชื้อ:

ก) เปิดปูกาแล้วตัดออกด้วยกรรไกร แยกเมมเบรนชั้นใต้ผิวออก และทาวัสดุบนเมมเบรน chorioallantoic (CAO) จากนั้นปิดรูในไข่ด้วยฝาแก้วปลอดเชื้อ และขอบของฝาจะแว็กซ์

b) ตัดสามเหลี่ยมที่มีความยาวด้านประมาณ 1 ซม. ในเปลือกออกด้วยตะไบเข็ม (ตะไบ) หรือมีดผ่าตัดแบบหยักที่ขอบของบูชาที่ด้านข้างของการนำเสนอของตัวอ่อน เอาส่วนของเปลือกออกและ เมมเบรนดาวฤกษ์ด้วยแหนบและแนะนำวัสดุ รูถูกปิดด้วยกระจกครอบที่ผ่านการฆ่าเชื้อ และขอบถูกพาราฟินหรือปิดผนึกด้วยเทปกาวฆ่าเชื้อ

c) ลบออกด้วยมีดผ่าตัด พื้นที่ขนาดเล็กเปลือกที่มีพื้นที่ประมาณ 0.5 ซม. ณ บริเวณที่มีตัวอ่อน จากนั้นจึงนำเยื่อหุ้มชั้นนอกออกในบริเวณนี้โดยใช้แหนบหรือเข็มแล้วฉีดวัสดุเข้าไป หากวัสดุไม่พอดีกับโพรงของไข่ คุณสามารถใช้กระเปาะยางเพื่อสูบลมออกจากไข่ผ่านรูในเปลือกบนไข่ และเป็นผลให้ไข่เทียมเกิดขึ้นที่ สถานที่ที่นำวัสดุเข้ามาแล้วจึงใส่วัสดุได้ง่าย รูในเปลือกถูกปิดด้วยปูนปลาสเตอร์หรือแว็กซ์

2) การติดเชื้อในช่องอัลลันโทอิก วิธีการติดไวรัสนี้ง่ายมาก และใช้เพื่อแยกไวรัสหลายชนิด สำหรับการติดเชื้อ จะใช้ตัวอ่อนอายุ 10-11 วัน มีสองตัวเลือกในการติดเชื้อ:

ก) การติดเชื้อเกิดขึ้นผ่านทาง puga โดยไม่ต้องตัดออก ใช้เข็มวัดระยะห่างจากด้านบนของ puga ถึงขอบของ puga โดยใช้ดินสอทำเครื่องหมายไว้ที่เปลือก แล้วสอดเข็มไปที่ความลึกที่ทำเครื่องหมายไว้และลึกลงไปอีก 0.5 ซม. เพื่อเจาะเยื่อหุ้ม chorioallantoic

b) วัสดุถูกสอดด้วยเข็มผ่านการเจาะเข้าไปในเปลือก ณ ตำแหน่งที่มีการนำเสนอตัวอ่อนจนถึงระดับความลึก 3-5 มม. ในบริเวณที่มีหลอดเลือด รูในเปลือกถูกปิดด้วยปูนปลาสเตอร์หรือแว็กซ์

3) การติดเชื้อในถุงไข่แดง ตัวอ่อนอายุ 5-8 วันใช้สำหรับการติดเชื้อ มีสองตัวเลือกในการติดเชื้อ:

ก) สอดเข็มจากด้านข้างของบูชาเข้าไปในถุงไข่แดงโดยทำมุม 45° ไปยังตำแหน่งที่ปรากฏของตัวอ่อนภายใต้การควบคุมของกล้องตรวจไข่

b) วางไข่บนขาตั้งโดยให้ตัวอ่อนชี้ลง และสอดเข็มจากบนลงล่างเข้าหาตัวอ่อนจนถึงความลึกประมาณ 1 ซม.

บริเวณที่ฉีดถูกปิดผนึกด้วยเทปกาวและพาราฟิน 4) การติดเชื้อในช่องน้ำคร่ำด้วยวิธีการติดเชื้อนี้ ไวรัสสามารถแทรกซึมและเพิ่มจำนวนในเซลล์ต่างๆ ที่สัมผัสกับน้ำคร่ำได้ เพื่อความสะดวกในการติดเชื้อ แนะนำให้ฟักตัวอ่อน 2-3 วันก่อนติดเชื้อโดยหงายหน้าขึ้น จากนั้นเอ็มบริโอและน้ำคร่ำจะเคลื่อนตัวขึ้นด้านบนและติดเชื้อได้สะดวกยิ่งขึ้น มีสองตัวเลือกในการติดเชื้อ:

ก) เปิดและตัด puga ออก ใช้แหนบเอาเยื่อหุ้มชั้นนอกออกแล้วหยิบน้ำคร่ำ ดึงน้ำคร่ำด้วยแหนบแล้วนำวัสดุในขนาด 0.1 มล. เข้าไปในช่องน้ำคร่ำ จากนั้นปิดรูในเปลือกด้วยฝาแก้วปลอดเชื้อและขอบด้วยแว็กซ์

b) การติดเชื้อโดยใช้เข็มยาวผ่าน puga ในห้องมืดภายใต้การควบคุมสายตา ขั้นแรกให้งอปลายเข็มเป็นมุมฉากเพื่อสร้างพื้นที่ขนาดเล็ก เข็มจะถูกสอดเข้าไปภายใต้การควบคุมของดวงตาผ่านทางส่วนที่ยื่นออกมาของพรีเอ็มบริโอ ในกรณีนี้ ภายใต้แรงกดของเข็มทื่อ เอ็มบริโอจะเคลื่อนที่ จากนั้นน้ำคร่ำจะถูกเจาะด้วยการกดเล็กน้อย และเข็มจะถูกดึงกลับเล็กน้อย . ในกรณีนี้ ตัวอ่อนควรขยับขึ้นไปด้านหลังเข็ม จากนั้นจึงแนะนำวัสดุ

5) การติดเชื้อเข้าสู่ร่างกายของเอ็มบริโอและการติดเชื้อเข้าสู่สมอง ใช้ตัวอ่อนอายุ 7-12 วัน การติดเชื้อจะดำเนินการโดยการนำวัสดุเข้าสู่ส่วนต่างๆ ของร่างกาย หรือเข้าสู่สมองโดยตรง สำหรับการติดเชื้อ พูกาจะเปิดออกและดึงตัวอ่อนออกด้วยแหนบ ด้วยวิธีการติดเชื้อเหล่านี้ ตัวอ่อนที่ติดเชื้อมากถึง 30% หรือมากกว่าอาจเสียชีวิตจากการบาดเจ็บ

6) การติดเชื้อในหลอดเลือดขนาดใหญ่ของเยื่อหุ้ม chorioallantoic วิธีการติดเชื้อนี้เหมือนกับวิธีก่อนหน้านั้นใช้น้อยมาก วัสดุจะถูกฉีดด้วยเข็มบางๆ หลังจากเอาเปลือกตามหลอดเลือดออกโดยตรงเข้าไปในหลอดเลือดตามการไหลเวียนของเลือด

หลังการติดเชื้อ จะต้องทำเครื่องหมายตัวอ่อนไก่ด้วยดินสอง่ายๆ และวางไว้ในเทอร์โมสตัท มีการตรวจติดตามทุกวันโดยการชม โดยจะสังเกตได้นานถึง 7-8 วัน ขึ้นอยู่กับชนิดของไวรัส หากเอ็มบริโอตาย พวกมันจะถูกเอาออกจากเทอร์โมสตัททันทีและนำไปแช่ในตู้เย็นจนกระทั่งเปิด หากเอ็มบริโอเสียชีวิตภายใน 14-18 ชั่วโมงแรก อาจเกิดจากการบาดเจ็บหรือความเป็นพิษของสารทางพยาธิวิทยา ดังนั้น เช่นเดียวกับเมื่อแพร่เชื้อในสัตว์ทดลอง ในกรณีที่มีข้อสงสัย แนะนำให้ทำหลายช่องและนำตัวอ่อนหลายตัวสำหรับแต่ละวัสดุ

การชันสูตรพลิกศพไก่ที่ติดเชื้อที่ตายหรือเอาออกหลังจากพ้นระยะเวลาสังเกตแล้ว จะดำเนินการตามกฎของอาเซพซิสทุกประการในสภาพชกมวยปลอดเชื้อ เมื่อเปิดเปลือกออก เปลือกจะถูกชุบแอลกอฮอล์แล้วเผา จากนั้นจึงตัดพุก้าออก จากตัวอ่อนที่เปิดอยู่น้ำอัลลันโทอิกจะถูกดูดออกอย่างระมัดระวังในขั้นแรก (ปริมาณประมาณ 7 มล.) จากนั้นเยื่อหุ้มน้ำคร่ำจะถูกดึงกลับด้วยแหนบเจาะด้วยปิเปตของปาสเตอร์และน้ำคร่ำจะถูกดูดออก (จำนวน 1.0- 1.5 มล.) จากนั้นเก็บไข่แดง เยื่อหุ้มเซลล์จะถูกเอาออกและตัวอ่อน มีการตรวจสอบของเหลว เยื่อหุ้มเซลล์ และตัวอ่อนอย่างระมัดระวังเพื่อดูการเปลี่ยนแปลง โดยปกติน้ำคร่ำจะมีใสสะอาด แต่เมื่อติดเชื้อแล้ว อาจมีสีขุ่นและมีเลือดปนได้ การเปลี่ยนแปลงลักษณะที่เกิดจากไวรัสนั้นเด่นชัดที่สุดในเยื่อหุ้มเซลล์ chorioallantoic: จุดโฟกัสการอักเสบปรากฏขึ้น, ทึบแสง, ทรงกลมและอาการตกเลือด อาการตกเลือดอาจเกิดขึ้นบนร่างกายของตัวอ่อน วัสดุทั้งหมดจะถูกรวบรวมในภาชนะที่ปลอดเชื้อ

เอ็มบริโอไก่ในด้านไวรัสวิทยาถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายไม่เพียงแต่สำหรับการแยกไวรัสเท่านั้น แต่ยังสำหรับการสะสมและรับแอนติเจน เพื่อเตรียมวัคซีนที่มีชีวิตและฆ่าแล้ว การไตเตรทไวรัส สำหรับการแสดงปฏิกิริยาการวางตัวเป็นกลางของไวรัส เพื่อลดไวรัส (ทำให้อ่อนแอลง) ไวรัส เพื่อศึกษาการแทรกแซงของ ไวรัสและการได้รับอินเตอร์เฟอรอน

การแนะนำวิธีการเพาะเลี้ยงไวรัสในเอ็มบริโอไก่มีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการพัฒนาไวรัสวิทยา สำหรับการแพร่พันธุ์ของไวรัสจะใช้ตัวอ่อนไก่อายุ 7-12 วันฟักในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37 C เงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาตัวอ่อนอย่างเหมาะสมคือการรักษาความชื้นในอากาศไว้ซึ่งสามารถสร้างได้โดยการวาง ภาชนะที่มีน้ำอยู่ในเทอร์โมสตัท การเพาะเลี้ยงไวรัสในเอ็มบริโอไก่จะดำเนินการในสถานที่ต่าง ๆ ของเอ็มบริโอที่ติดเชื้อ:

1) บนเยื่อหุ้มเซลล์ choion-allantoic;

2) เข้าไปในโพรงอัลลันโทอิก;

3) เข้าไปในโพรงน้ำคร่ำ;

4) ลงในถุงไข่แดง

การติดเชื้อของตัวอ่อนไก่จะดำเนินการในกล่องโดยใช้เครื่องมือที่ปลอดเชื้อ ก่อน: การติดเชื้อ เช็ดตัวอ่อนไก่สองครั้งด้วยสำลีชุบแอลกอฮอล์

การติดเชื้อของเยื่อหุ้มคอรีออน-อัลลานโตอิก. หลังจากการฆ่าเชื้อไข่แล้ว ให้ตัดเปลือกบางส่วนออกจากปลายทู่อย่างระมัดระวัง แล้วเอาเยื่อหุ้มชั้นย่อยออก ซึ่งเผยให้เห็นเยื่อหุ้มคอรีออน-อัลลาติโออิก วัสดุติดเชื้อในปริมาณ 0.1-0.2 มิลลิลิตรถูกนำไปใช้กับเมมเบรน choion-allantoic โดยใช้เข็มฉีดยาหรือปิเปตปาสเตอร์ หลังการติดเชื้อ หลุมจะถูกปิดด้วยฝาปิด และช่องว่างระหว่างมันกับเอ็มบริโอไก่จะเต็มไปด้วยพาราฟิน อีกด้านหนึ่งของไข่ ให้เขียนชื่อวัสดุที่ติดเชื้อและวันที่ติดเชื้อด้วยดินสอธรรมดา

การติดเชื้อในช่องน้ำคร่ำไข่เป็นแบบส่องกล้อง และเลือกบริเวณด้านข้างซึ่งคอรีออน-อัลลันตัวส์ไม่มีเส้นเลือดขนาดใหญ่ บริเวณนี้ถูกทำเครื่องหมายด้วยดินสอ ไข่จะถูกวางบนขาตั้งในแนวนอน ฆ่าเชื้อ และเจาะรูด้วยหอกฆ่าเชื้อแบบพิเศษ และเปลือกมีความลึก 2-3 มม. โดยแทงเข็มที่มีวัสดุติดเชื้อในระยะห่างเดียวกันเข้าไปในโพรงน้ำคร่ำโดยตรง เพื่อป้องกันไม่ให้ของเหลวที่ฉีดไหลย้อนกลับ จะต้องเจาะเหนือถุงลมก่อน หลังจากนั้นทั้งสองหลุมจะเต็มไปด้วยพาราฟิน

การติดเชื้อในช่องอัลลันโทอิกการติดเชื้อจะดำเนินการในกล่องสีเทาด้วย ช่องอากาศถูกทำเครื่องหมายไว้ เปลือกเหนือช่องอากาศจะถูกฆ่าเชื้อ และเข็มฉีดยาที่มีวัสดุสอดเข้าไปในรูในเปลือกเข้าหาตัวอ่อน หากเข็มเข้าไปในโพรงอัลลันโทอิก จะสังเกตการกระจัดของเงาของตัวอ่อน หลังการติดเชื้อ รูจะเต็มไปด้วยพาราฟิน

การติดเชื้อในถุงไข่แดงเปลือกถูกฆ่าเชื้อ วางไข่ไว้บนขาตั้งโดยให้ปลายทู่ไปทางขวาโดยให้เครื่องหมายไข่แดงหงายขึ้น เจาะรูตรงกลางเหนือช่องอากาศ เข็มฉีดยาถูกสอดเข้าไปในรูในเปลือกในแนวนอนที่ความลึก 2-3 มม. ซึ่งเข้าไปในถุงไข่แดง วัสดุถูกบริหารในปริมาตร 0.2-0.3 มล. หลังจากแนะนำวัสดุแล้ว รูจะถูกแว็กซ์

ขึ้นอยู่กับอุณหภูมิและระยะเวลาฟักตัว คุณสมบัติทางชีวภาพของไวรัสตัวนี้ ไข่ที่ติดเชื้อจะถูกตรวจสอบทุกวันและทำการส่องไข่เพื่อตรวจสอบความมีชีวิตของเอ็มบริโอ หากเอ็มบริโอตายในวันแรก สาเหตุมักเกิดจากการบาดเจ็บระหว่างการติดเชื้อ ไข่ดังกล่าวฟักออกมาจากประสบการณ์ การมีอยู่ของไวรัสในเอ็มบริโอที่ติดเชื้อนั้นพิจารณาจากการเปลี่ยนแปลงลักษณะเฉพาะในเยื่อหุ้มเซลล์คอรีออน-อัลลานโตอิกของเอ็มบริโอไก่ที่ติดเชื้อ ตรวจพบไวรัสที่ไม่มีกิจกรรมการสร้างเม็ดเลือดแดงโดยใช้ RSC เพื่อตรวจหาไวรัสในน้ำอัลลันโทอิกหรือน้ำคร่ำของเอ็มบริโอที่ติดเชื้อ จะดำเนินการ RGA

เนื่องจากพบว่าไวรัสไข้หวัดใหญ่แพร่พันธุ์ในเอ็มบริโอของไก่ วิธีนี้จึงถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านไวรัสวิทยา เนื่องจากใช้งานง่ายและไม่แพง

ใช้ตัวอ่อนไก่อายุ 7-9 วัน (วงจรการพัฒนาเต็มคือ 21 วัน)

ก่อนการติดเชื้อพื้นผิวจะได้รับการบำบัดด้วยแอลกอฮอล์และสารละลายไอโอดีนทำรูในเปลือกและติดเชื้อด้วยเข็มฉีดยาที่ปราศจากเชื้อ

วิธีการติดเชื้อ: เข้าไปในโพรงน้ำคร่ำ, เข้าไปในโพรงอัลลันโทอิกหรือเข้าไปในถุงไข่แดง ไวรัสจะเพิ่มจำนวนบนเยื่อหุ้มเซลล์ที่เกี่ยวข้องและสะสมอยู่ในของเหลวในโพรง ซึ่งสามารถรวบรวมเพื่อการวิจัยต่อไปได้

เพาะเลี้ยงตัวอ่อนที่อุณหภูมิ 37 องศา 3 วัน จากนั้นจึงนำเปลือกมาแปรรูปอีกครั้ง เปิดตัวอ่อนด้วยเครื่องมือปลอดเชื้อ และเก็บของเหลวที่มีไวรัส งานทั้งหมดเกี่ยวกับการติดเชื้อและการเปิดจะดำเนินการในกล่อง

การปลูกฝังการเพาะเลี้ยงเซลล์

การเพาะเลี้ยงเซลล์เริ่มถูกนำมาใช้ในด้านไวรัสวิทยาค่ะ ทศวรรษที่ผ่านมาทำให้สามารถเพาะเลี้ยงและศึกษาไวรัสได้หลากหลายมากขึ้น เนื่องจากไวรัสในมนุษย์บางชนิดไม่สามารถแยกออกจากสัตว์หรือเอ็มบริโอได้ ดังนั้น ไวรัสวิทยาสมัยใหม่จึงใช้การเพาะเลี้ยงเซลล์ ซึ่งขณะนี้ได้มีอยู่จำนวนมาก

ประเภทของการเพาะเลี้ยงเซลล์

ก) หลัก -ที่ได้จากเนื้อเยื่อของตัวอ่อนโดยการบด บำบัดด้วยทริปซินเพื่อแยก (แยก) เซลล์และเพาะเลี้ยงต่อไป

ในหลอดทดลองในของเหลวเพาะเลี้ยงพิเศษ

b) พันกัน– ที่ได้จากเนื้อเยื่อเนื้องอก มีความโดดเด่นด้วยความจริงที่ว่าสามารถปลูกได้ไม่จำกัด โดยเปลี่ยนเฉพาะอาหารเลี้ยงเชื้อและอาหารเท่านั้น

ในระหว่างขั้นตอนการเพาะปลูกจะได้ชั้นเดียวบนกระจก : นั่นคือเซลล์หนึ่งชั้น

ตอนนี้คุณสามารถแพร่เชื้อเซลล์เหล่านี้ด้วยวัสดุทดสอบด้วยไวรัสสมมุติหรือไวรัสที่มีอยู่ อาหารที่มีเซลล์ทั้งที่ติดเชื้อและไม่ติดเชื้อ จะถูกเพาะเลี้ยงในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37 องศา

กระบวนการสะสมของไวรัสในการเพาะเลี้ยงเซลล์ใช้เวลาประมาณ 48–72 ชั่วโมง

กำลังหยิบขึ้นมา พืชผลที่เหมาะสมไวรัสของมนุษย์เกือบทั้งหมดสามารถเพาะเลี้ยงได้

ขั้นต่อไปของการศึกษาคือการบ่งชี้และจำแนกไวรัส

วิธีการบ่งชี้

ข้อบ่งชี้ –นี่คือการตรวจจับไวรัสโดยตรงในวัสดุทดสอบหรือในของเหลวเพาะเลี้ยงหรือในเซลล์ที่ติดเชื้อ

I. หากไวรัสอยู่ในของเหลว สามารถตรวจพบได้โดยใช้ปฏิกิริยาฮีแม็กกลูติเนชัน

สาระสำคัญของปฏิกิริยา: ไวรัสบางประเภทสามารถเกาะติดกันตามธรรมชาติ (นั่นคือทำให้เกิดเม็ดเลือดแดง) ของเม็ดเลือดแดงบางชนิด ตัวอย่างเช่น ไวรัสไข้หวัดใหญ่เกาะติดกับเซลล์เม็ดเลือดแดงของไก่ อะดีโนไวรัสบางชนิดเกาะติดกับเซลล์เม็ดเลือดแดงของหนู เป็นต้น

ดังนั้นการใช้สารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดงในสารละลายทางสรีรวิทยาจึงสามารถตรวจพบไวรัสในของเหลวที่มีไวรัสได้

ครั้งที่สองหากไวรัสขยายตัวในการเพาะเลี้ยงเซลล์ แต่มีการสร้างเม็ดเลือดแดงขึ้น ไวรัสเหล่านั้นสามารถตรวจพบได้โดยใช้ปฏิกิริยาการดูดซึมฮีมาดซัพพอร์ต: สารแขวนลอยของเซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกนำไปใช้กับการเพาะเลี้ยง บ่มเพาะ และระบายออก - หากการเพาะเลี้ยงติดเชื้อ เซลล์เม็ดเลือดแดงจะ ติดโดยตรงกับเซลล์ที่ติดเชื้อ - สามารถมองเห็นได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง

III.ผลกระทบอื่นๆ:

ก) ไวรัสทำให้เกิดการทำลายชั้นเดียว - นี่เรียกว่าผลทางไซโตพาโทนิกของไวรัส - CPE

b) ไวรัสทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาในเซลล์: การรวมภายในเซลล์หรือในนิวเคลียร์, การก่อตัวของ syncytium, symplasts (นั่นคือการรวมตัวของเซลล์หลาย ๆ เซลล์ในรูปแบบเดียวเนื่องจากความเสียหายต่อเยื่อหุ้มเซลล์)

วัตถุประสงค์ของบทเรียน:เพื่อให้นักศึกษาคุ้นเคยกับวิธีการแพร่เชื้อตัวอ่อนไก่เพื่อเพาะเชื้อไวรัส

อุปกรณ์และวัสดุ:ตัวอ่อนไก่ ระยะฟักตัว 9-12 วัน ไข่ตก สำลีแอลกอฮอล์ ย่อมาจาก เอ็มบริโอ แหนบ กรรไกร เทปกาว เข็ม กระบอกฉีดยา ดินสอ เข็มเจาะ เข็ม ตาราง ไดอะแกรม อุปกรณ์มัลติมีเดีย การนำเสนอ เอ็มเอส ออฟฟิศ พาวเวอร์พอยต์ในหัวข้อของบทเรียน

คำอธิบายของครู.

วิธีการติดเชื้อส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อการสืบพันธุ์ของไวรัสในเอ็มบริโอ ก่อนการติดเชื้อ ไข่ที่ฟักแล้วจะถูกจุดเทียน และไข่ที่ตายจะถูกแยกออกจากกัน บนเปลือกไข่ที่มีเอ็มบริโอมีชีวิตซึ่งโดดเด่นด้วยสีแดงของหลอดเลือดและการเคลื่อนไหวของเอ็มบริโอบริเวณที่ติดเชื้อจะถูกทำเครื่องหมายด้วยดินสอ

ตัวอ่อนจะติดเชื้อในกล่องปลอดเชื้อซึ่งมีโต๊ะทำงาน อุจจาระ 2 ตัว ระบบจ่ายแก๊ส น้ำประปา และเครื่องดูดฝุ่น การติดเชื้อในช่องน้ำคร่ำเกิดขึ้นในห้องมืด สถานที่ทำงานควรมีแสงสว่างเพียงพอ ก่อนเริ่มงานจะมีการฆ่าเชื้อโต๊ะ ในการฆ่าเชื้อพื้นผิวของไข่ ให้เตรียมสารละลายฆ่าเชื้อ (แอลกอฮอล์ 70% สารละลายไอโอดีน 2%) แล้วห่อด้วยสำลี แท่งไม้, หัววัดทันตกรรมแบบงอหรือสว่านสำหรับเจาะ เปลือกไข่- ไข่จะติดเชื้อโดยใช้กระบอกฉีดยาฆ่าเชื้อสำหรับวัณโรคและเข็มพิเศษ บริเวณที่ติดเชื้อบนไข่จะเต็มไปด้วยพาราฟิน เมื่อต้องการทำเช่นนี้ ให้เตรียมแท่งพาราฟิน: แท่งแก้วถูกสอดเข้าไปในหลอดทดลองที่เต็มไปด้วยพาราฟินหลอมเหลว ตรวจสอบให้แน่ใจว่ามันอยู่ตรงกลางหลอดทดลองจนกว่าพาราฟินจะเย็นลง

เมื่อต้องการแท่งพาราฟิน ผนังของหลอดทดลองจะถูกทำให้ร้อนบนหัวเผา และดึงพาราฟินออกจากหลอดทดลองโดยใช้แท่งแก้ว ถือแท่งไฟไว้เหนือเปลวไฟ ละลายพาราฟินตามปริมาณที่ต้องการเพื่อปิดรูในไข่ วิธีนี้สะอาดมากและไม่ก่อให้เกิดควันพาราฟิน

นอกจากนี้ แก้วที่มีสำลีปลอดเชื้อ แก้วที่มีสารละลายโซดาไฟ 3% สำหรับเครื่องมือที่ใช้แล้ว และภาชนะที่มีสารละลายคลอรามีนสำหรับวัตถุแก้วที่ใช้แล้วจะถูกวางไว้บนโต๊ะในกล่อง หากจำเป็น คุณสามารถเตรียมถ้วยไข่ ถ้วยเคลือบฟันขนาดเล็ก และอุปกรณ์เพาะเชื้อปลอดเชื้อได้ โต๊ะทำงานที่เตรียมไว้ในลักษณะนี้ต้องผ่านการฉายรังสี UV เป็นเวลา 1-2 ชั่วโมง

เมื่อพิจารณาถึงความก่อโรคของไวรัสที่กำลังศึกษา งานจะดำเนินการโดยสวมหน้ากาก ถุงมือยาง และแว่นตานิรภัย

มีหกวิธีในการติดเชื้อเอ็มบริโอ การติดเชื้อมักใช้ในโพรง allantoic และบนเยื่อหุ้ม chorioallantoic บ่อยครั้ง - ในช่องน้ำคร่ำและในถุงไข่แดงและน้อยมาก - ในร่างกายของตัวอ่อนและในหลอดเลือดของ CAO การเลือกวิธีการจะขึ้นอยู่กับเขตร้อนของไวรัสตลอดจนวัตถุประสงค์ของการติดเชื้อ สำหรับวิธีการติดเชื้อใด ๆ ให้ฉีดสารติดเชื้อ 0.1-0.2 มิลลิลิตร

การติดเชื้อในช่องอัลลันโทอิก

เมื่อติดเชื้อด้วยวิธีนี้ ไวรัสไข้หวัดใหญ่ โรคนิวคาสเซิล โรคจมูกอักเสบในม้า ตุ่มเปื่อย ฯลฯ จะทวีคูณได้ดี วิธีการนี้มีหลายวิธี

ตัวเลือกแรกตัวอ่อนจะได้รับการแก้ไขในแนวตั้งโดยให้ปลายทื่อหงายขึ้น รูที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 1 มม. ถูกสร้างขึ้นในเปลือกที่ด้านข้างของเอ็มบริโอ และบางครั้งก็อยู่ด้านตรงข้ามกับเอ็มบริโอ ซึ่งอยู่เหนือขอบของช่องอากาศ 5-6 มม. เข็มถูกสอดขนานกับแกนตามยาวจนถึงความลึก 10-12 มม. (รูปที่ 16) หลังจากฉีดวัสดุที่มีไวรัสแล้ว เข็มจะถูกดึงออก และปิดรูในเปลือกด้วยหยดพาราฟินฆ่าเชื้อที่ละลายแล้ว

รูปที่ 16 การติดเชื้อในช่อง allantoic (ตัวเลือกแรก) (อ้างอิงจาก Nikolaou)

ตัวเลือกที่สองรูที่ทำในเปลือกเหนือช่องอากาศจะใช้เพื่อให้อากาศบางส่วนระบายออกไปเท่านั้น รูสำหรับการติดเชื้อนั้นเกิดขึ้นในบริเวณโซน avascular ของเยื่อหุ้ม chorioallantoic (CAO) ที่ด้านข้างของตัวอ่อน สอดเข็มเข้าไปลึกไม่เกิน 2-3 มม. ฉีดของเหลวติดเชื้อในปริมาตร 0.1-0.2 มล. แล้วปิดรูด้วยพาราฟิน (ดูรูปที่ 17)

การติดเชื้อของเยื่อหุ้ม chorioallantoic

วิธีการติดเชื้อเอ็มบริโอไก่นี้มักใช้ในการเพาะเลี้ยงไวรัส epitheliotropic และ pantropic ของไข้ทรพิษ, กล่องเสียงอักเสบติดเชื้อของนก, โรคไข้หัด, โรค Aujeszky, ลิ้นสีน้ำเงิน ฯลฯ

การติดเชื้อดังกล่าวสามารถทำได้ผ่านช่องอากาศธรรมชาติหรือช่องอากาศเทียม

สำหรับการติดเชื้อ ผ่านช่องอากาศธรรมชาติเอ็มบริโอจะถูกวางในแนวตั้งบนขาตั้งโดยให้ปลายทู่หงายขึ้น และในเปลือกจะมีหน้าต่างทรงกลมที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 15-20 มม. ตัดตรงกลางช่องอากาศ ผ่านหน้าต่างนี้เมมเบรน subshell จะถูกลบออกด้วยแหนบ สารแขวนลอยที่มีไวรัส 0.2 มม. ถูกนำไปใช้กับพื้นที่สัมผัสของ CAO (รูปที่ 18) ปิดรูด้วยปูนปลาสเตอร์กาวหรือไม่ค่อยบ่อยนักโดยใช้กระจกปิดเสริมด้วยพาราฟินหลอมเหลว

การติดเชื้อ ผ่านห้องอากาศเทียมถูกใช้บ่อยกว่าครั้งแรก เนื่องจากช่วยให้มั่นใจว่าวัสดุที่มีไวรัสสัมผัสกับพื้นผิว CW ที่ใหญ่กว่า ดังนั้นจึงนำไปสู่การก่อตัวของไวรัสในปริมาณที่มากขึ้น

รูปที่ 17 การติดเชื้อของเอ็มบริโอไก่ในช่องอัลลันโทอิก (ตัวเลือกที่สอง) (อ้างอิงจาก Nikolaou)

รูปที่ 18 การติดเชื้อที่บริเวณเขาผ่านช่องอากาศธรรมชาติ (อ้างอิงจาก Nikolaou et al.)

รูปที่ 19 การติดเชื้อของตัวอ่อนไก่ที่บริเวณเขาผ่านห้องระบายอากาศเทียม (อ้างอิงจาก Nikolaou et al.)

หากต้องการแพร่เชื้อให้เอ็มบริโอด้วยวิธีนี้ ให้วางตัวอ่อนไว้ในแนวนอนโดยให้เอ็มบริโอหงายขึ้น มีการสร้างรูสองรูในเปลือก: รูเล็ก ๆ เหนือตรงกลางของช่องอากาศ (ออกแบบมาเพื่อดูดอากาศจากมัน) และอีกรูที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 0.2-0.5 ซม. ที่ด้านข้างที่ด้านข้างของตัวอ่อน ความซับซ้อนของวิธีการคือเมื่อทำการเจาะรูที่ 2 คุณต้องเอาเปลือกออกอย่างระมัดระวังก่อน จากนั้นจึงเลื่อนเปลือกไปด้านข้างโดยใช้การเคลื่อนที่แบบเลื่อนโดยไม่ทำให้สารเคมีเสียหายเพื่อให้อากาศผ่านได้ ข้อบกพร่อง หลังจากนั้น อากาศจะถูกดูดออกจากช่องอากาศธรรมชาติโดยใช้หลอดยางผ่านรูแรก (รูปที่ 19, a) ส่งผลให้ผ่านรูด้านข้าง อากาศภายนอกวิ่งเข้าไปด้านในสร้างห้องอากาศเทียมซึ่งด้านล่างคือ XAO (รูปที่ 19, b)

ผ่านรูด้านข้าง ของเหลวติดเชื้อจะถูกทาลงบนพื้นผิวของ CAO และปิดรูด้วยเทปกาว ไม่จำเป็นต้องปิดรูแรก เนื่องจากชั้นในของเยื่อหุ้มเปลือกไม่ได้รับความเสียหายจากวิธีการติดเชื้อนี้ และยังคงทำหน้าที่เป็นอุปสรรคต่อจุลินทรีย์ในสิ่งแวดล้อม

การฟักตัวของตัวอ่อนที่ติดเชื้อด้วยวิธีนี้เพิ่มเติมจะดำเนินการในแนวนอนโดยหงายช่องด้านข้างขึ้น

การติดเชื้อในถุงไข่แดง

โดยส่วนใหญ่ใช้สำหรับการแพร่กระจายของหนองในเทียม เช่นเดียวกับไวรัสของโรคมาเร็ค ริดนิวโมเนียในม้า ลิ้นสีน้ำเงินของแกะ ฯลฯ พวกมันจะทำให้เอ็มบริโอติดเชื้อในระยะเวลา 5-7 วัน และบางครั้งอาจมีอายุ 2-3 วัน (RIF) ไวรัสไข้หุบเขา) มีการใช้ตัวเลือกการติดเชื้อสองแบบ

ตัวเลือกแรกเอ็มบริโอจะถูกวางบนขาตั้งในแนวตั้ง เจาะรูในเปลือกเหนือตรงกลางช่องอากาศแล้วสอดเข็มไปที่ความลึก 3.5-4 ซม. ที่มุม 45° ถึง แกนแนวตั้งในทิศทางตรงกันข้ามกับตำแหน่งของตัวอ่อน (รูปที่ 20)

รูปที่ 20 การติดเชื้อของเอ็มบริโอลูกไก่เข้าไปในถุงไข่แดง (อ้างอิงจาก Nicolaou และคณะ)

ตัวเลือกที่สองบางครั้งเส้นทางการติดเชื้อที่คล้ายกันเกิดขึ้นกับเอ็มบริโอที่ติดตั้งในแนวนอนบนขาตั้ง ในกรณีนี้ เอ็มบริโอจะอยู่ด้านล่างและไข่แดงจะอยู่ด้านบน รูในเปลือกปิดด้วยพาราฟินหลอมเหลวหยดหนึ่ง

การติดเชื้อในช่องน้ำคร่ำ

เพื่อจุดประสงค์นี้ จะใช้ตัวอ่อนอายุ 6 ถึง 10 วัน วิธีการใช้เพาะเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่ โรคนิวคาสเซิล โรคจมูกอักเสบจากม้า ฯลฯ การติดเชื้อมี 2 วิธี

วิธีการปิดการติดเชื้อจะดำเนินการในกล่องที่มืด วางไข่บนรีโอสโคปในแนวนอนโดยให้เอ็มบริโอหงายขึ้น เข็มที่มีปลายทู่จะถูกสอดเข้าไปในรูในเปลือกเหนือช่องอากาศไปทางตัวอ่อน ข้อพิสูจน์ว่าเข็มทะลุน้ำคร่ำคือการเคลื่อนไหวของร่างกายของทารกในครรภ์ในทิศทางของการเคลื่อนไหว

วิธีการเปิด.เปลือกเหนือช่องอากาศถูกตัดเพื่อให้เกิดหน้าต่างที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 1.5-2.5 ซม. เมมเบรนเปลือกย่อยจะถูกลบออกด้วยแหนบภายใต้การควบคุมสายตา จากนั้นจึงนำแหนบทางกายวิภาค (14 ซม.) ที่มีขากรรไกรปิด โดยดันเมมเบรน chorioallantoic ไปทางตัวอ่อน เมื่อแหนบไปถึงขากรรไกรก็จะเปิดออก คว้าเยื่อหุ้มน้ำคร่ำพร้อมกับ CAO แล้วดึงไปที่หน้าต่าง ใช้มือซ้ายจับแหนบโดยให้เมมเบรนแอมเนียนติดอยู่ จากนั้นจะมีวัสดุที่มีไวรัสเข้ามา (รูปที่ 21) จากนั้นเมมเบรนทั้งหมดจะถูกลดระดับลง ปิดหน้าต่างด้วยพลาสเตอร์ปิดแผล และฟักตัวอ่อนในแนวตั้ง

รูปที่ 21 การติดเชื้อของตัวอ่อนลูกไก่ในน้ำคร่ำ วิธีการเปิด(อ้างอิงจาก Nikolaou และคณะ)

การติดเชื้อในหลอดเลือดของ XAO

เมื่อฟักไข่ในตัวอ่อนอายุ 11-13 วัน จะสังเกตเห็นเส้นเลือดใหญ่ เมื่อดำเนินการต่อไป ส่วนหนึ่งของเปลือกจะถูกเอาออก และทาแอลกอฮอล์ 1-2 หยด ซึ่งจะทำให้เยื่อหุ้มเปลือกโปร่งใสอยู่พักหนึ่ง ภายใต้การควบคุมสายตาโดยใช้เครื่องตรวจไข่ เข็มจะถูกสอดเข้าไปในหลอดเลือด ซึ่งได้รับการยืนยันจากการเคลื่อนไหวด้วยการเคลื่อนไหวของเข็มด้านข้างเล็กน้อย พื้นที่สัมผัสของเมมเบรนใต้เปลือกถูกปิดด้วยแผ่นพลาสเตอร์ปิดแผล

วัสดุสามารถนำเข้าไปในภาชนะด้วยวิธีที่แตกต่างออกไปเล็กน้อย: เปลือกเหนือช่องอากาศถูกตัดออก, เมมเบรนเปลือกใต้ชุบแอลกอฮอล์และวัสดุถูกนำเข้าไปในภาชนะ XAO ที่มองเห็นได้ รูถูกปิดด้วยเทปกาวฆ่าเชื้อ

วิธีการทางเทคนิคที่อธิบายไว้สำหรับการทดลองติดเชื้อเอ็มบริโอไก่นั้นไม่ได้เป็นเพียงวิธีการเดียวเท่านั้น แต่ยังมีตัวเลือกต่างๆ มากมาย

การติดเชื้อในร่างกายของตัวอ่อน

ตัวอ่อนอายุ 7-12 วันใช้สำหรับการติดเชื้อ วิธีการที่ทราบมีสองเวอร์ชัน

ตัวเลือกแรกติดเชื้อในลักษณะเดียวกับในน้ำคร่ำ ในลักษณะปิดมีความแตกต่างเพียงอย่างเดียวคือใช้เข็มแหลมคมและบนรังไข่ตัวบ่งชี้ของเข็มที่เข้าสู่ร่างกายถือเป็นการอยู่ใต้บังคับบัญชาของตัวอ่อนต่อการเคลื่อนไหวของเข็ม

ตัวเลือกที่สองพวกมันติดเชื้อในน้ำคร่ำในลักษณะเดียวกับที่เปิด: ผ่านหน้าต่างในเปลือกร่างกายของตัวอ่อนจะถูกดึงด้วยแหนบ วัสดุจะถูกฉีดเข้าไปในสมองหรือบริเวณเฉพาะของร่างกาย ด้วยวิธีการติดเชื้อดังกล่าว ทำให้มีเปอร์เซ็นต์การตายของเอ็มบริโอที่ไม่จำเพาะเจาะจงอย่างมีนัยสำคัญ

การสะสมของไวรัสในตัวอ่อนลูกไก่

ก่อนที่จะฟักตัวเพิ่มเติม บนเปลือกของตัวอ่อนไก่ที่ติดเชื้อด้วยวิธีการใดๆ พวกเขาจะเขียนด้วยดินสอธรรมดา (กราไฟท์) ว่าตัวอ่อนติดเชื้ออะไร และข้อมูลอื่นๆ เมื่อใด และหากจำเป็น ตัวอ่อนไก่ที่ติดเชื้อจะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทเพื่อการฟักตัวต่อไป ในระหว่างนั้นไวรัสที่ได้รับการแนะนำจะถูกสืบพันธุ์และสะสมในโครงสร้างที่เกี่ยวข้อง อุณหภูมิในการฟักตัวของเอ็มบริโอจะแตกต่างกันไปตั้งแต่ 33 ถึง 38 °C ขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของไวรัสที่ทำการติดเชื้อ ตัวอ่อนจะได้รับการตรวจสอบอย่างต่อเนื่อง ตรวจด้วยกล้องส่องไข่ และคัดเลือกตัวอ่อนที่ตาย

การตายของเอ็มบริโอใน 24 ชั่วโมงแรกหลังการติดเชื้อมักเกิดจากการแพร่ขยายของเชื้อรา จุลินทรีย์จากแบคทีเรียที่เข้าไปในเอ็มบริโอพร้อมกับหัวเชื้อ หรือการบาดเจ็บระหว่างการติดเชื้อ การเสียชีวิตครั้งนี้ถือว่าไม่เฉพาะเจาะจง มากขึ้น วันที่ล่าช้าตามกฎแล้วเอ็มบริโอจะตายจากการเพิ่มจำนวนไวรัสในเอ็มบริโอ เมื่อพบตัวอ่อนที่ตายแล้ว พวกมันจะถูกย้ายไปยังตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4 °C ทันที เงื่อนไขดังกล่าวมีส่วนช่วยในการรักษากิจกรรมของไวรัสที่สะสมในเอ็มบริโอ ในทางกลับกัน เพื่อการบดอัดของเนื้อเยื่อและความว่างเปล่าของหลอดเลือด ซึ่งอำนวยความสะดวกอย่างมากในการผ่าภายหลัง

ตัวอ่อนจะถูกฟักจนเกิดการสะสมของไวรัสสูงสุด สำหรับไวรัสและสายพันธุ์แต่ละชนิด ช่วงเวลานี้จะเฉพาะเจาะจงและแตกต่างกันไปตั้งแต่ 2 ถึง 7-8 วัน ดังนั้นสำหรับไวรัสโรคนิวคาสเซิลสายพันธุ์ H คือ 2-3 วันสำหรับไวรัสสายพันธุ์เดียวกัน B - 5 วันสำหรับไวรัสกล่องเสียงอักเสบที่ติดเชื้อในนก - 5 วัน เป็นต้น จากนั้นตัวอ่อนทั้งหมดจะถูกฆ่าโดยการทำความเย็นที่อุณหภูมิ 4 ° C สำหรับ อย่างน้อย 3-4 ชั่วโมงแล้วเปิด

ไข่ที่ผ่าแล้ว.

วิธีการนี้อาศัยการนำตัวอ่อนออกจากไข่ในช่วงเวลาที่เยื่อ chorioallantoic อยู่ติดกับเปลือกอย่างสมบูรณ์จากด้านใน หากมีการเติมสารอาหารลงในไข่ การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อชนิดหนึ่งจะเกิดขึ้นซึ่งไวรัสสามารถแพร่ขยายได้ วิธีการนี้มีข้อดีหลายประการ: ช่วยให้ได้รับไวรัสที่บริสุทธิ์กว่าในน้ำคร่ำอัลลันโทอิกซึ่งเป็นสิ่งสำคัญในการลดคุณสมบัติภูมิแพ้ของวัคซีนที่เตรียมจากวัสดุนี้ การไม่มีถุงไข่แดงและแอนติบอดีจำเพาะที่มีอยู่ในนั้นทำให้ไวรัสบางชนิดสามารถแพร่พันธุ์ได้ดีขึ้น ในบางกรณีวิธีนี้ให้ ผลลัพธ์ที่ดีในงานวินิจฉัยเนื่องจากอนุญาตให้นำวัสดุทดสอบจำนวนมากซึ่งจะเพิ่มความเป็นไปได้ของการแยกไวรัส

วิธีการนี้เสนอโดย Bernkopf เมื่อปี 1949 แต่เนื่องจากความยากลำบากในการใช้งาน จึงไม่ค่อยมีการใช้กันอย่างแพร่หลาย ปัญหาเหล่านี้เกี่ยวข้องกับคุณสมบัติของเยื่อหุ้ม chorioallantoic ที่จะแยกออกจากเปลือกในระหว่างการฟักตัว ซึ่งจะลดคุณค่าของการเพาะเลี้ยง และทำให้การจัดการในการรับไวรัสและการเปลี่ยนสารอาหารมีความซับซ้อนยิ่งขึ้น

E. Groiel (1963) นำเสนอการปรับเปลี่ยนหลายอย่างที่ช่วยขจัดปัญหาเหล่านี้ เขาแนะนำให้ใช้ไข่ที่มีอายุ 15 วันหรือแก่กว่านั้น ซึ่งควรพลิกบ่อยๆ ระหว่างการฟักไข่เพื่อให้แน่ใจว่าเปลือกบนเปลือกไข่จะพัฒนาสม่ำเสมอ เมื่อได้รับแสงทรานส์ลูมิเนท ขอบเขตของช่องอากาศจะถูกระบุ เปลือกถูกเลื่อยออกเหนือเส้นนี้ 0.5 ซม. แล้วเทพาราฟินหลอมเหลว (56-58 C°) ลงบนขอบของเปลือก ซึ่งจะทำให้ขอบไข่แข็งตัวและยึดติด จากนั้นเจาะรูกลมในเมมเบรนเหนือเอ็มบริโอ โดยเหลือขอบแคบๆ ไว้รอบๆ ขั้นตอนต่อไปคือการเอาตัวอ่อนออกจากไข่อย่างระมัดระวัง ในกรณีนี้ ควรจับไข่ในแนวนอนและหมุนช้าๆ ด้วยวิธีนี้ จะพบภาชนะที่เชื่อมต่อตัวอ่อนกับ CAO และตัดด้วยกรรไกร หากจับไข่ในแนวตั้งตัวอ่อนที่มีมวลจะดึงเปลือกกลับคืนมาโดยปกติจะฉีกออกบริเวณปลายแหลมของไข่ การเข้ามาของของเหลวในปริมาณเล็กน้อยระหว่างสารเคมีกับเปลือกจะทำให้เปลือกหลุดออกโดยสมบูรณ์ภายใน 1-2 วัน

หลังจากนำเอ็มบริโอออกแล้ว ให้ล้างเมมเบรนที่บุไข่หลาย ๆ ครั้งด้วยน้ำเกลือที่ทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ 4-0°C จนกระทั่งของเหลวใส จากนั้นนำสารอาหาร 20 มล. ที่ให้ความร้อนถึง 37 ° C เข้าไปในโพรงไข่และปิดไข่ด้วยฝายางที่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยแช่ไว้ในพาราฟินก่อนหน้านี้ ท่อที่มีจุกยางฝังอยู่ในไข่ช่วยให้สามารถรวบรวมและจ่ายของเหลวได้โดยไม่ต้องเสี่ยงต่อการปนเปื้อนของแบคทีเรีย วัตถุทางชีวภาพดังกล่าวยังคงมีชีวิตอยู่ได้หลายวัน

ตามวิธีการของโยชิโนะและคนอื่นๆ โพรงของไข่ที่แยกไข่ออกจะเต็มไปด้วยสารละลายวุ้นในสารละลายของแฮงค์ส ไข่ที่แยกออกจากไข่จะติดเชื้อผ่านท่อในฝา

คำถามเพื่อความปลอดภัย:

1. โครงสร้างของเอ็มบริโอไก่

2. เหตุใดจึงมีการใช้เอ็มบริโอไก่ในไวรัสวิทยา?

3. โครงสร้างของเอ็มบริโอไก่ที่กำลังพัฒนาเป็นอย่างไร?